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Aobious  ELISA Kit FOR 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1

貓?zhí)枺?/span> E0269h

范圍：0.156-10 ng/mL

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摩爾濃度計(jì)算車®

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每 96 噸685.00美元

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有可能的使用

該免疫測(cè)定試劑盒可用于體外定量測(cè)定人 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1、血清、血漿、尿液、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體中的濃度。

測(cè)試原理

該試劑盒中提供的微量滴定板已預(yù)涂有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1 特異性抗體。然后將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品添加到適當(dāng)?shù)奈⒘康味ò蹇字?，并在每個(gè)微孔板中添加對(duì) 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 特異的偶聯(lián)多克隆抗體制劑和與辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯(lián)的抗蛋白并孵化。然后將 TMB 底物溶液添加到每個(gè)孔中。只有那些含有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1、偶聯(lián)抗體和酶偶聯(lián)抗蛋白的孔才會(huì)出現(xiàn)顏色變化。通過添加硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng)，并在 450 nm ± 2 nm 波長(zhǎng)下用分光光度計(jì)測(cè)量顏色變化。然后通過將樣品的 OD 與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來確定樣品中的濃度。

材料和組件

試劑                                                                              數(shù)量

測(cè)定板 1

標(biāo)準(zhǔn) 2

樣品稀釋液 1 × 20ml

測(cè)定稀釋劑 A 1 × 10ml

測(cè)定稀釋劑 B 1 × 10ml

檢測(cè)試劑A 1×120μl

檢測(cè)試劑 B 1 × 120μl

洗滌緩沖液（25 x 濃縮液）1 × 30ml

底物 1 × 10ml

終止液 1 × 10ml

用于 96 孔的封板劑 5

說明 1

所需的其他用品

酶標(biāo)儀

移液器和移液器吸頭

EP管

去離子水或蒸餾水

試劑盒的儲(chǔ)存

檢測(cè)板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B 收到后應(yīng)保存在 -20℃。收到試劑盒后，底物應(yīng)始終保存在 4℃。其他試劑按照小瓶上的標(biāo)簽保存。但要長(zhǎng)期存放，請(qǐng)將整個(gè)試劑盒保持在-20℃。未使用的條帶應(yīng)保存在密封袋中，并提供干燥劑，以盡量減少暴露在潮濕空氣中。試劑盒可在試劑盒的有效期內(nèi)使用（自生產(chǎn)之日起六個(gè)月）。只要按照上述規(guī)定進(jìn)行儲(chǔ)存，打開的檢測(cè)試劑盒將保持穩(wěn)定直到所示的失效日期。

樣品收集和儲(chǔ)存

血清 - 使用血清分離管 (SST) 并讓樣品凝結(jié) 30 分鐘，然后以大約 1000 × g 的速度離心 15 分鐘。立即取出血清并進(jìn)行檢測(cè)或分裝樣品并在-20℃或-80℃保存。

血漿 - 使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。收集樣品 30 分鐘內(nèi)，在 2℃ - 8℃ 下以 1000 × g 離心 15 分鐘。將樣品儲(chǔ)存在-20℃或-80℃。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

尿液 - 無菌收集當(dāng)天的第一次尿液（中游），直接排入無菌容器中。離心除去顆粒物，立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在≤-20℃。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

組織勻漿-組織勻漿 的制備將因組織類型而異。對(duì)于該測(cè)定，組織用 1X PBS 沖洗以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中勻漿，并在 ≤ -20℃ 下儲(chǔ)存過夜。 進(jìn)行兩次凍融循環(huán)以破壞細(xì)胞膜后，將勻漿離心 5分鐘 5000 x g。立即取出上清液并進(jìn)行測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在≤ -20℃。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物體液 - 通過離心去除微粒并立即測(cè)定或分裝樣品并在 -20℃ 或 -80℃ 下儲(chǔ)存。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

筆記：

5天內(nèi)用完的樣品可在2-8℃保存，否則樣品必須在-20℃（1個(gè)月）或-80℃（2個(gè)月）保存，以免失去生物活性和污染。

由于某些化學(xué)物質(zhì)的影響，使用化學(xué)裂解緩沖液制備的組織或細(xì)胞提取樣品可能會(huì)導(dǎo)致意外的 ELISA 結(jié)果。

受細(xì)胞活力、細(xì)胞數(shù)量和采樣時(shí)間等因素的影響，試劑盒可能無法檢測(cè)到來自細(xì)胞培養(yǎng)上清液的樣本

樣品溶血會(huì)影響結(jié)果，因此溶血標(biāo)本無法檢測(cè)。

進(jìn)行測(cè)定時(shí)，將樣品緩慢帶到室溫。

不要使用經(jīng)過熱處理的樣品。

程序的限制

AOBIOUS 只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)檢測(cè)過程中消耗的樣品負(fù)責(zé)。用戶應(yīng)計(jì)算整個(gè)測(cè)試中可能使用的樣本量。請(qǐng)?zhí)崆邦A(yù)留足夠的樣品。

試劑盒不應(yīng)超過試劑盒標(biāo)簽上的有效期。

不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合或替代。

如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用樣品稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品并重復(fù)測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑、操作員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度以及試劑盒使用時(shí)間的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合的變化。

試劑制備

洗滌緩沖液 - 如果濃縮液中形成晶體，溫?zé)嶂潦覝夭⑤p輕混合直至晶體*溶解。將 30 mL 洗滌緩沖液濃縮液稀釋到去離子水或蒸餾水中，制備 750 mL 洗滌緩沖液。

標(biāo)準(zhǔn)品 - 用 1.0 mL 樣品稀釋劑重新配制標(biāo)準(zhǔn)品。這種重構(gòu)產(chǎn)生 200 ng/mL 的儲(chǔ)備溶液。在進(jìn)行連續(xù)稀釋之前，讓標(biāo)準(zhǔn)靜置至少 15 分鐘并輕輕攪拌（不允許直接在孔中進(jìn)行連續(xù)稀釋）。未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品用作高標(biāo)準(zhǔn)品 (200 ng/mL)。樣品稀釋劑用作零標(biāo)準(zhǔn) (0 ng/mL)。

ng/mL 200 100. 50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

檢測(cè)試劑 A 和 B - 分別使用檢測(cè)稀釋劑 A 和 B (1:100) 稀釋至工作濃度。

測(cè)定程序

讓所有試劑達(dá)到室溫（請(qǐng)不要將試劑直接在37℃溶解）。所有試劑在移液前應(yīng)通過輕輕旋轉(zhuǎn)*混合。避免起泡。 為 1 次實(shí)驗(yàn)保留適當(dāng)數(shù)量的條帶，并從微量滴定板上移除多余的條帶。取出的試紙條應(yīng)重新密封并在 4℃ 下保存至試劑盒有效期。按照前幾節(jié)的指示準(zhǔn)備所有試劑、工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品。請(qǐng)?jiān)跍y(cè)定前預(yù)測(cè)濃度。如果這些值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，用戶必須為其特定實(shí)驗(yàn)確定最佳樣品稀釋度。

每孔加入 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品、空白或樣品。蓋上板封口機(jī)。37℃孵育2小時(shí)。

除去每孔的液體，不要洗滌。向每個(gè)孔中加入 100 μl 檢測(cè)試劑 A 工作溶液。蓋上板封口機(jī)。37℃孵育1小時(shí)。檢測(cè)試劑 工作溶液可能出現(xiàn)混濁。溫?zé)嶂潦覝夭⑤p輕混合直至溶液均勻。

吸出每個(gè)孔并清洗，重復(fù)該過程 3 次，共清洗 3 次。通過使用噴瓶、多通道移液器、歧管分配器或自動(dòng)清洗器向每個(gè)孔填充清洗緩沖液（約 400 μl）進(jìn)行清洗。在每個(gè)步驟中*去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。最后一次洗滌后，通過吸出或傾析去除任何剩余的洗滌緩沖液。將板倒置并用干凈的紙巾吸干。

每孔加入 100 μl 檢測(cè)試劑 B 工作溶液。蓋上新的板封口機(jī)。37℃孵育1小時(shí)。

重復(fù)步驟 4 中的抽吸/洗滌。

向每個(gè)孔中加入 90 μl 底物溶液。蓋上新的板封口機(jī)。37℃孵育15-30分鐘。避光。

向每個(gè)孔中加入 50 μl 終止溶液。如果顏色變化不均勻，輕輕敲擊板以確保充分混合。

使用設(shè)置為 450 nm 的微孔板讀取器一次確定每個(gè)孔的光密度。

筆記：

吸光度是孵育時(shí)間的函數(shù)。因此，在開始檢測(cè)之前，建議在使用前新鮮制備所有試劑，并將所有需要的條孔固定在微量滴定框架中。這將確保每個(gè)移液步驟的經(jīng)過時(shí)間相等，不會(huì)中斷。

請(qǐng)按照說明小心重新配制標(biāo)準(zhǔn)品或工作檢測(cè)試劑 A 和 B，避免起泡并輕輕混合直至晶體*溶解。重新配制的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)試劑 A 和 B 只能使用一次。該測(cè)定需要小體積移液。為盡量減少移液引起的不精確，請(qǐng)確保已校準(zhǔn)移液器。一次移液時(shí)，建議吸取 10μl 以上。

為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中必須正確粘附封板劑。不要讓孔在孵育步驟之間長(zhǎng)時(shí)間未覆蓋。一旦將試劑添加到孔條中，在檢測(cè)過程中的任何時(shí)候都不要讓條干燥。

對(duì)于程序中的每個(gè)步驟，將試劑添加到檢測(cè)板的總分配時(shí)間不應(yīng)超過 10 分鐘。

為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谔砑用總€(gè)標(biāo)準(zhǔn)液、添加樣品和添加試劑之間更換移液器吸頭。此外，為每種試劑使用單獨(dú)的容器。

洗滌程序至關(guān)重要。洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致精度差和吸光度讀數(shù)錯(cuò)誤升高。

建議復(fù)制所有標(biāo)準(zhǔn)和樣品，盡管不是必需的。

底物溶液很容易被污染。請(qǐng)避光。

特異性

該檢測(cè)可識(shí)別重組和天然人 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)或干擾。

注：受限于現(xiàn)有技術(shù)和知識(shí)，我們不可能完成人類與所有類似物之間的交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此交叉反應(yīng)可能仍然存在。

檢測(cè) 范圍

3.12-200 納克/毫升。

結(jié)果計(jì)算

平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、對(duì)照和樣品的重復(fù)讀數(shù)，并減去平均零標(biāo)準(zhǔn)光密度。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯 (4-PL) 曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件減少數(shù)據(jù)來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。作為替代方案，通過在 x 軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度與 y 軸上的濃度來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過圖表上的點(diǎn)繪制最佳擬合曲線。可以通過繪制 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 濃度的對(duì)數(shù)對(duì) OD 的對(duì)數(shù)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性化，并且可以通過回歸分析確定最佳擬合線。建議使用一些相關(guān)的軟件來做這個(gè)計(jì)算，比如曲線專家1.3。此過程將產(chǎn)生適當(dāng)?shù)惶_的數(shù)據(jù)擬合。如果樣品已被稀釋，則從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取的濃度必須乘以稀釋因子。

重要提示：

受限于現(xiàn)狀和科學(xué)技術(shù)，我們無法對(duì)供應(yīng)商提供的原材料進(jìn)行全面的鑒定和分析。因此使用該套件可能存在一些定性和技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)

最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將與產(chǎn)品的有效性、終端用戶的操作技能和實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。請(qǐng)確保有足夠的樣品可用。

不同批次的試劑盒在檢測(cè)范圍、靈敏度、顯色時(shí)間等方面可能略有差異。請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本站電子版僅供參考。

第一次開板時(shí)，孔內(nèi)可能會(huì)有一些霧狀物質(zhì)。它不會(huì)對(duì)最終的化驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生任何影響。

除非需要，否則不要從儲(chǔ)存袋中取出微量滴定板。

具有 10nm 或更小帶寬和 450nm 波長(zhǎng)處 0-3 OD 或更大光密度范圍的微量滴定板讀數(shù)器可用于吸光度測(cè)量。

每次轉(zhuǎn)移時(shí)使用新的一次性移液器吸頭以避免污染。

不要將試劑從一個(gè)試劑盒批次替換到另一個(gè)試劑盒批次。僅使用制造商提供的試劑。

即使是同一個(gè)操作員，在兩個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中也可能得到不同的結(jié)果。為了獲得更好的重現(xiàn)性結(jié)果，應(yīng)控制測(cè)定中每個(gè)步驟的操作。此外，建議在每批檢測(cè)前進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)。

每個(gè)試劑盒都經(jīng)過嚴(yán)格的 QC 測(cè)試。但是，由于一些意外的運(yùn)輸條件或不同的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，最終用戶的結(jié)果可能與我們的內(nèi)部數(shù)據(jù)不一致。來自不同批次的試劑盒之間的測(cè)定內(nèi)差異也可能來自上述因素。

來自不同制造商的相同產(chǎn)品的套件可能會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果，因?yàn)槲覀儧]有將我們的產(chǎn)品與其他制造商進(jìn)行比較。

有效期：六個(gè)月。

預(yù)防

建議用于該試劑盒的終止溶液是酸性溶液。使用此材料時(shí)，請(qǐng)佩戴眼部、手部、面部和衣物保護(hù)裝置。

典型數(shù)據(jù)

此圖表數(shù)據(jù)作為示例顯示。每次運(yùn)行測(cè)定時(shí)都必須生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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其他的這些是菌株

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