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家/Transnetyx 組織常見問題解答 | Transnetyx 組織

文化傳媒

1.培養(yǎng)基 (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX™) 能穩(wěn)定多久？

Transnetyx的培養(yǎng)基可在 4 o C 避光保存長達(dá) 6 個月。為防止氧化，可以將培養(yǎng)基分裝成更小的體積并儲存在 4 o C。

2. 我需要多久進(jìn)行一次媒體交換？

Transnetyx每 3 到 4 天更換 1/2 培養(yǎng)基，但這部分取決于細(xì)胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細(xì)胞密度高于 500/mm 2，則每 2 天更換 1/2。

3. NbActiv1™ 和 NbActiv4® 有什么區(qū)別？

NbActiv4® 含有與 NbActiv1™ 相同的成分以及膽固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4® 主要用作電生理學(xué)介質(zhì)。  

4. 鋪板海馬培養(yǎng)物時，通常向 NbActiv1™ (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX™) 或 NbActiv4® (Neurobasal ® /B27 ® /GlutaMAX ) 添加 25uM 谷氨酸

™/膽固醇/雌激素/肌酸）直至培養(yǎng)第 4 天。谷氨酸的目的是什么？

它幫助海馬神經(jīng)元發(fā)芽并促進(jìn)活力。在 DIV4 后，應(yīng)使用不含谷氨酸的培養(yǎng)基進(jìn)行半次培養(yǎng)基交換。

5.漏掉谷氨酸有問題嗎？

在 DIV4 中，您的存活率將降低約 30%。

6. 如果我在 NbActiv1™ 中培養(yǎng)細(xì)胞，我可以將培養(yǎng)基更換為 NbActiv4® 嗎？

是的，在培養(yǎng)過程中的任何時候，培養(yǎng)基都可以從 NbAcitv1™ 更改為 NbActiv4®。然而，事實(shí)并非如此。接種在 NbActiv4® 中的細(xì)胞不應(yīng)更換為 NbActiv1™。

7.我需要哪些額外的用品來維持培養(yǎng)物？

每個訂單包含足夠的培養(yǎng)基以開始培養(yǎng)并維持 4 或 5 天。除此之外，您還需要更多培養(yǎng)基，Transnetyx可以通過 Invitrogen 單獨(dú)購買完整的即用型配方。您還需要選擇鍍膜玻璃或塑料基材，Transnetyx推薦使用聚-D-賴氨酸作為基材。除此之外，您還需要解離溶液，Transnetyx推薦Transnetyx的 Papain and Hibernate® E-Ca 和火拋光移液器。Transnetyx將所有這些用品都包含在Transnetyx的完整培養(yǎng)套件中。

8.我應(yīng)該在電鍍培養(yǎng)基中添加抗生素/抗真菌劑嗎？例如：pen/strep/fungizone 還是慶大霉素？

Transnetyx通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，并取得了很好的成功。這具有三個優(yōu)點(diǎn)：

首先，當(dāng)出現(xiàn)污染時，更容易識別污染源。其次，如果你使用抗生素，當(dāng)你被感染時，就更難擺脫了。第三，抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動。使用抗生素是一種常見的做法，類型和濃度取決于最終用戶。

Hibernate® 媒體

Hibernate ®、Neurobasal ® 和 B27 ® 僅用于研究目的，由 Invitrogen Corporation 制造。Hibernate ®、Neurobasal ® 和 B27 ® 是 Invitrogen Corporation 的商標(biāo)。

1. Hibernate® Media 能穩(wěn)定多久？

Transnetyx的 Hibernate 可在 4 o C 的黑暗中保存長達(dá) 1 年。為防止氧化，可以將培養(yǎng)基分裝成更小的體積并儲存在 4 o C。

2.您是否總是在 Hibernate® 中添加 B27® 和 GlutaMAX™，還是僅在 Hibernate® 中保持細(xì)胞存活？

幾乎總是。請參見 Brewer 和 Price (1996) PM:8856709 的圖 1 在 37 o C 環(huán)境 CO 2中，Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™ 中的 LD50 為 24 小時，而在 Hibernate®/B27®/GlutaMAX® 中為大于 3 天。

3.Transnetyx可以提供定制的 Hibernate 配方嗎？

是的，Transnetyx可以提供定制的 Hibernate 配方。

4. Hibernate 的其他用途包括：

轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過程中的大腦儲存。

將腦組織運(yùn)送給合作者。

基質(zhì)

1.我的神經(jīng)元更多地以細(xì)胞簇或細(xì)胞團(tuán)的形式生長，而不是孤立的。怎么了？

這意味著細(xì)胞與自身的粘附比與基底的粘附更緊密。最可能的問題是準(zhǔn)備不足的底物。將您的方案與推薦的聚-D-賴氨酸制備和底物涂層進(jìn)行比較。另一種可能性是電鍍密度可能太高。

2.關(guān)于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸，我假設(shè)使用聚-D-賴氨酸，因?yàn)槿绻纸獬少嚢彼?，則d賴氨酸不能被細(xì)胞使用。這有什么道理嗎？

這就是理論。在一些早期研究中（Brain Res. 494:65(1989)），Transnetyx發(fā)現(xiàn)差別不大。

3 . 一些研究人員使用聚乙烯亞胺 (PEI) 代替聚-D-賴氨酸 (PDL)。一個比另一個有優(yōu)勢嗎？

PEI 比 PDL 便宜。Transnetyx在 PEI 上沒有取得太大成功，但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal®/10% 血清中培養(yǎng)后一直使用它。報告表明神經(jīng)元存活率或峰值率沒有顯著差異。

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其他的這些是菌株

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