服務(wù)熱線
15201163601
-
vmrd如何培養(yǎng)成纖維細(xì)胞
發(fā)布時(shí)間： 2023-03-15 點(diǎn)擊次數(shù)： 380次北京華新康信現(xiàn)貨 大力回饋新老客戶，現(xiàn)貨打折出售，現(xiàn)有品牌和種類，新老客戶可以自由選購(gòu)：Coriell北京試劑coriell常見問(wèn)題與解答 Coriell上海試劑coriell試劑 coriell廣東試劑coriell深圳試劑coriell河北試劑coriell上海試劑coriell北京試劑 coriell安徽試劑 coriell河南試劑
Coriell代理，coriell上海試劑coriell廣東試劑coriell廣州試劑coriell深圳試劑coriell內(nèi)蒙古試劑coriell河南試劑coriell江蘇試劑coriell江西試劑coriell湖北試劑coriell湖南試劑coriell安徽試劑coriell蘇州試劑coriell杭州試劑coriell浙江試劑coriell南昌試劑coriell北京試劑coriell天津試劑coriell遼寧試劑coriell寧夏試劑coriell深圳試劑 CORIELL 制劑存儲(chǔ) Coriell天津試劑 Coriell天津試劑
vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹 vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹
vmrd試劑盒-動(dòng)物測(cè)試報(bào)告 vmrd試劑盒-動(dòng)物測(cè)試報(bào)告 moltox瀝青微煙實(shí)驗(yàn) moltox瀝青微煙實(shí)驗(yàn)
培養(yǎng)成纖維細(xì)胞應(yīng)該使用什么培養(yǎng)基？有關(guān)單個(gè)細(xì)胞系的培養(yǎng)基的詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱 目錄，在單個(gè)樣本詳細(xì)信息頁(yè)面的“培養(yǎng)協(xié)議"選項(xiàng)卡中。在使用之前，我們將 L- 氨酰胺(或等效物)加入到2mM 的最終濃度中。如果細(xì)胞培養(yǎng)基的長(zhǎng)期儲(chǔ)存不成問(wèn)題，可以使用含有氨酰胺(或等效物)的商業(yè)制備培養(yǎng)基?？评餇栄芯克皇褂每股鼗蚩拐婢幬?，因?yàn)樵诩?xì)胞儲(chǔ)存庫(kù)中存在隱性感染的危險(xiǎn)。如果需要，研究人員可以添加抗生素。如果細(xì)胞培養(yǎng)比預(yù)期的要慢，我們的第一種方法是切換到另一批預(yù)先測(cè)試的血清和/或改變血清濃度5% 。生長(zhǎng)緩慢的其他原因包括: 微生物污染，過(guò)于頻繁的繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)過(guò)低密度播種，細(xì)胞系衰老，培養(yǎng)基組成的變化，以及培養(yǎng)箱在調(diào)節(jié)溫度、濕度或 CO2方面的不足
如何處理新接收的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)？程序: 1。觀察細(xì)胞片的匯合情況，細(xì)胞形態(tài)和污染跡象。用消毒液擦拭培養(yǎng)瓶，放在37 °C 的培養(yǎng)箱中過(guò)夜，放下細(xì)胞片。不要移除培養(yǎng)基(只含有5% 的 FBS 以減緩運(yùn)輸過(guò)程中的生長(zhǎng))。第二天，如上所述檢查燒瓶，根據(jù)培養(yǎng)物的匯合情況，要么通過(guò)取出運(yùn)輸培養(yǎng)基并用約5ml 生長(zhǎng)培養(yǎng)基覆蓋細(xì)胞來(lái)喂養(yǎng)燒瓶，要么根據(jù)下面概述的程序繼代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)繼代培養(yǎng)一個(gè)新收到的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)，必須確定正確的傳代數(shù)。如果提交表或瓶子上注明了通過(guò)號(hào)，繼代培養(yǎng)的瓶子應(yīng)該得到下一個(gè)連續(xù)的通過(guò)號(hào)。
成纖維細(xì)胞系是如何繼代培養(yǎng)的？供應(yīng)• HBSS 中的0.53 mM EDTA • HBSS 中的0.04% 蛋白酶/0.53 mM EDTA •成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基程序: 1。通過(guò)抽吸去除中間部分。2。使用試劑的適當(dāng)體積見表1。3。加入適量的 EDTA 溶液到燒瓶中，不要移動(dòng)電池片，將燒瓶的電池面朝下放置。
4.通過(guò)倒置顯微鏡仔細(xì)觀察細(xì)胞長(zhǎng)達(dá)10分鐘。如果細(xì)胞開始變圓或離開燒瓶，立即取出 EDTA 溶液。5。用 EDTA/蛋白酶溶液取代 EDTA 溶液。6。將燒瓶置于攝氏37度的環(huán)境下培養(yǎng)4至7分鐘。這些細(xì)胞會(huì)聚集起來(lái)，然后從燒瓶表面分離出來(lái)。7。擰緊瓶蓋，輕輕地敲打瓶子的側(cè)面，把剩余的細(xì)胞從瓶子里取出來(lái)。8。用顯微鏡檢查燒瓶，確保細(xì)胞全部分離。如果7分鐘后細(xì)胞沒(méi)有分離，再培養(yǎng)1到2分鐘。9。用生長(zhǎng)培養(yǎng)基(停止培養(yǎng)基)清洗燒瓶的背面，使蛋白酶失活，然后輕輕地將細(xì)胞和培養(yǎng)基混合。10。刪除一個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)等分試樣，并計(jì)數(shù)細(xì)胞。11。根據(jù)表2.12給燒瓶播種。將燒瓶放置在一個(gè)保溫箱中，保溫箱設(shè)置為適合單個(gè)細(xì)胞系的參數(shù)(通常為37 °C，5% CO2) ，如果沒(méi)有通風(fēng)，則松開瓶蓋。幾個(gè)小時(shí)后檢查培養(yǎng)物的細(xì)胞附著情況和 pH 值，繼代培養(yǎng)間隔的時(shí)間取決于細(xì)胞系。大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞系需要每5-7天進(jìn)行一次亞培養(yǎng)。如果培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)5天，每3-4天更換一次培養(yǎng)基。
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物如何冷凍用于低溫儲(chǔ)存？用品• HBSS 中的0.53 mM EDTA • HBSS 中的0.04% 蛋白酶/0.53 mM EDTA •成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基•成纖維細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基(含10% 甘油或5% DMSO 的生長(zhǎng)培養(yǎng)基)程序1。如果細(xì)胞在10% 的甘油中冷凍，完整的冷凍培養(yǎng)基可以保持在室溫下直到使用。以二甲基亞砜配制的冷凍介質(zhì)應(yīng)冷藏至使用為止。用顯微鏡檢查每個(gè)要冷凍(冷凍池)的燒瓶是否有污染和任何不尋常的生長(zhǎng)模式。一個(gè)燒瓶應(yīng)該作為一個(gè)“備用"燒瓶，直到可以檢查冷凍的可行性。3。對(duì)于每個(gè)燒瓶，按照上面的子培養(yǎng)步驟1-9進(jìn)行。4。轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸浮液從所有燒瓶和池細(xì)胞在離心機(jī)瓶坐在冰上。5.從冷凍池中取出一份等分試樣進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞數(shù)并計(jì)算出冷凍池中存活的細(xì)胞總數(shù)。6。將冷凍池以60-100克的溫度在8-10 °C 下離心10分鐘。取出上清液，用溫和的研磨冷凍培養(yǎng)基以每毫升至少5 × 105個(gè)活細(xì)胞的最終濃度重新懸浮細(xì)胞團(tuán)。將1毫升細(xì)胞懸浮液分裝到玻璃安瓿或塑料冷凍瓶中。9。使用氧丙烷火焰密封玻璃安瓿。檢查每個(gè)玻璃安瓿是否有在4 °C 浸泡在甲藍(lán)/乙醇中密封時(shí)形成的針孔或玻璃氣泡。10。將安瓿或冷凍瓶以每分鐘 -1攝氏度至 -80攝氏度的速度冷凍(在微處理器控制的冰箱中或被動(dòng)地置于異丙醇浴中，在 -80攝氏度的冰箱中過(guò)夜)。將冷凍細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中。將玻璃安瓿浸入液體中，在氣相中儲(chǔ)存塑料冷凍瓶。
如何從低溫儲(chǔ)存中回收成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物？程序1。準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。從冷凍儲(chǔ)存的容器中取出一個(gè)安瓿或冷凍瓶，立即放入攝氏37度的水中，用力攪拌。3。一旦全解凍，用70% 的酒精海綿或同等消毒劑消毒安瓿或冷凍瓶。用銼刀劃破玻璃安瓿的頸部，然后用開瓶器打開。
4.使用無(wú)菌移液管移除安瓿或冷凍瓶中的內(nèi)容物，并將其放入含有5毫升適當(dāng)新鮮培養(yǎng)基的 T25組織培養(yǎng)瓶中。5。如果需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，用1毫升移液管輕輕地混合瓶中的物質(zhì)，取出0.2毫升用1:5稀釋的細(xì)胞計(jì)數(shù)。將燒瓶放在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)箱中，細(xì)胞表面朝下。輕輕旋轉(zhuǎn)燒瓶，使細(xì)胞懸浮液均勻地分布在燒瓶表面。調(diào)整蓋子以允許適當(dāng)?shù)臍怏w交換(取決于介質(zhì)的緩沖系統(tǒng))。成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)在恢復(fù)后第二天用新鮮培養(yǎng)基重新喂養(yǎng)。如果通過(guò)清洗和離心去除所有的低溫保護(hù)劑，一些細(xì)胞系恢復(fù)得更好。將安瓿或冷凍液轉(zhuǎn)移到含有3-5毫升生長(zhǎng)培養(yǎng)基的15毫升離心管中。在60-100xg 和8-10 °C 下離心5分鐘。除去上清液，重新懸浮顆粒，然后轉(zhuǎn)移到 T25燒瓶中，最終容量約為5毫升。如上所述，繼代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞所需的培養(yǎng)。如果1-2周后細(xì)胞無(wú)法增殖，擴(kuò)大備用燒瓶進(jìn)行第二次冷凍。
coriell
coriell上海試劑
coriell廣東試劑
coriell深圳試劑
coriell北京試劑
coriell天津試劑
coriell安徽試劑
coriell遼寧試劑
coriell河北試劑
coriell
coriell江蘇試劑
coriell浙江試劑
coriell河南試劑
coriell上海試劑
coriell寧夏試劑
coriell山東試劑
coriell遼寧試劑
coriell河北試劑
coriell
coriell四川試劑
coriell湖北試劑
coriell湖南試劑
coriell福建試劑
coriell重慶試劑
coriell陜西試劑
coriell山西試劑
coriell北京試劑
coriell
coriell內(nèi)蒙古試劑
coriell廣西試劑
coriell貴州試劑
coriell云南試劑
coriell江西試劑
coriell湖南試劑
coriell黑龍江試劑
coriell甘肅試劑